HPLC測定沒食子中沒食子酸的含量

摘要：目的建立沒食子中沒食子酸的含量測定方法。方法采用液相色譜法測定沒食子酸的含量，色譜柱為Waters Symme @Cl8柱（5μm，4．6 mm×150mm）；流動相為甲醇一0．05％磷酸溶液（5：95）；流速0．8 ml·min ；檢測波長273 Bill。結(jié)果沒食子酸進樣量在0．0506～0．4060μg范圍內(nèi)線性關系良好，平均加樣回收率為98．99％，RSD：1．5％。結(jié)論所用方法簡便、快速、準確。
關鍵詞：沒食子；沒食子酸；HPLC
中圖分類號：R917 文獻標識碼：A 文章編號：1006—0103（2005）01—0071—02
Determination of gallic acid in Turkish gaUs by HPLC
REN Yuan，DU Nian—sheng（Pharmacy College ofXinjiang Medical University，Urmnqi 830054，Ch／na）

Abstract：OBJECTIVE To establish a determination method of gallic acid in Turkish galls．METHODS An HPLC method was used .The column was packed with Waters Symmetry@Ci8（5μm，4．6mm×150 mm）．The phase was methanol一0． 05％ ph0sphoric acid（5：95）．The flow rate was 0．8 ml/min．The detective wavelength was at 273 nln．RESULTS The calibration curves were linear within 0．O506—0．4O6Oμg．Th e recovery Was 98．99％ with兄 of 1．5％ ．CONCLUSION Th is method is simple，rapid and accurate．
Key words：Turkish Galls；Gallic acid；HPLC

    沒食子是由沒食子蜂的幼蟲寄生于沒食子樹幼枝上所產(chǎn)成的蟲癭。沒食子中含有鞣質(zhì)和沒食子酸，為維吾爾醫(yī)生常用藥，具有收斂、抗炎、促進黏膜愈合的作用。現(xiàn)參照文獻|J 采用HPLC測定沒食子中沒食子酸的含量。
1 實驗部分
1．1 儀器與試藥：液相色譜儀包括Waters Delta 6OO泵，waters 2996 PDA檢測器（美國Waters公司）。沒食子藥材（新疆維吾爾自治區(qū)藥品檢驗所鑒定）；沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0831—9501）；甲醇（色譜純）；磷酸（分析純）；水為重蒸水。
1．2 色譜條件
    色譜柱為Waters SymmetryCl8（5μm，4．6mm×150 mm）；流動相為甲醇一0．05％磷酸溶液（5：95）；檢測波長273nm；流速0．8 ml/min ；柱溫25℃。
1．3 方法與結(jié)果
1．3．1 溶液的制備：精密稱取沒食子粗粉1 g，置50 m1量瓶中，加甲醇30 m1，超聲提取1 h，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液l m1，甲醇定容至l0 m1量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品2．55mg，置50 m1量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得對照品溶液。
1．3．2 線性范圍的考察：精密吸取沒食子酸對照品溶液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0 ml于5個l0 m1量瓶中，分別加甲醇至刻度，搖勻，各吸取l0 l注入液相色譜儀，以進樣量（ g）為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，回歸，得線性方程為：A=1．468×lO6C-1． 739×lO4（r=0．9997）。結(jié)果表明，沒食子酸在0．0506 0．4O60／_tg范圍內(nèi)，具有良好的線性關系。
1．3．3 精密度試驗：在“1．2．1”項條件下，精密吸取沒食子酸對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，峰面積的RSD=1．3％ ，表明儀器精密度良好。
1．3．4 穩(wěn)定性實驗：取室溫下放置的樣品溶液，在20 h內(nèi)進樣6次，其峰面積的RSD=2．4％，表明樣品溶液在室溫下20 h穩(wěn)定。
1．3．5 方法精密度（重復性）試驗：精密稱取沒食子藥材1 g，按“1．3．1”項下方法制備6份供試品溶液，分別測定沒食子酸的含量，RSD=3．8％，證明此方法精密度良好。
1．3．6 加樣回收率試驗：精密稱取已知含量的沒食子樣品細粉，分別加入沒食子酸對照品，按“1． 3．8”項下方法測定沒食子酸的含量，再計算回收率，結(jié)果見表1。
1．3．7 樣品的測定：精密稱取沒食子藥材1 g，按“1． 3．1”項下方法制備供試品溶液，經(jīng)微孔濾膜（0．45μm）過濾，取續(xù)濾液l0 l進樣，同時進l0μl對照品溶液，進樣5次，用峰面積按外標法計算，得沒食子酸的平均含量31．65 mg/g，RSD=0．98％（n=5）。

2 討論
    沒食子中主要含有可水解的鞣質(zhì)，加熱提取會水解成沒食子酸，因此，樣品選用超聲提取的方法。曾分別超聲0．5、1．0、1．5、2．0 h，結(jié)果顯示，1．0 h已經(jīng)提取*。文中方法用于沒食子中沒食子酸的含量測定，操作簡便，結(jié)果準確。

參考文獻：
【1】 劉起中，張可可．HPLC法測定五倍子中沒食子酸的含量[J]中草藥，2002，33（5）：427