液相色譜法在生物堿分析中的應(yīng)用

         生物堿是植物中一類重要化學(xué)成分，許多生物堿或含生物堿的提取物已廣泛用于醫(yī)藥領(lǐng)域，因此對不同來源的、存在于較復(fù)雜體系或基質(zhì)中的生物堿進(jìn)行快速、靈敏、可靠的定性和定量分析一直是受人矚目的研究課題。 

1、生物堿液相色譜的分析模式  
        根據(jù)液相色譜分析生物堿時所使用固定相性質(zhì)、流動相組成及極性不同，其分析模式大致可分為：正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統(tǒng)色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法。 
        正相吸附色譜法：通常以硅膠基質(zhì)為吸附固定相，流動相為不同極性的有機(jī)溶劑或不同比例混合溶劑，分離過程主要依靠生物堿與吸附劑吸附作用的差異實現(xiàn)，為了改善分離，提高溶洗脫能力，常于流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。該法應(yīng)用于生物堿分析的文獻(xiàn)較少。  
        正相硅膠一反相洗脫系統(tǒng)色譜法（NS-RE）：通常采用未經(jīng)化學(xué)改性的普通硅膠為固定相，以極性有機(jī)溶劑（甲醇、乙腈）和高pH緩沖溶液為流動相，分析包括生物堿在內(nèi)的堿性藥物。該法柱效高，峰形對稱，是簡便有效的方法。在實際應(yīng)用中，流動相的組成是主要的影響因素，流動相中除含有調(diào)節(jié)pH 的緩沖鹽外，有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子。因此，影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 。  
        反相液相色譜法（RP-液相色譜）：近年來RP-液相色譜應(yīng)用于生物堿分析方面的文獻(xiàn)很多，已成為常規(guī)的方法。但普通存在拖尾峰（tailing peak）。前者少見。>色譜峰的展寬拖尾，導(dǎo)致分離效能低，這主要緣于生物堿結(jié)構(gòu)中堿性氮原子與固定相未鍵臺酸性硅醇基的相互作用。即使是所測生物堿在較低濃度下，仍常產(chǎn)生峰漂移及峰對稱性差等現(xiàn)象。針對此缺陷，研究工作者從適用于堿性物質(zhì)分析的反相填料的設(shè)計選擇，流動相中緩沖鹽的使用，流動相添加劑（離子對試劑、有機(jī)胺改性劑）等幾方面進(jìn)行了較為廣泛細(xì)致的研究，并取得了一定的進(jìn)展。 
        離子交換色譜法：該法以陽離子交換樹脂為固定相，利用質(zhì)子化的生物堿陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達(dá)到分離生物堿的目的，有關(guān)生物堿液相離子交換色譜法的應(yīng)用報道較少。 

2、生物堿液相色譜分析檢測方法  
        目前，生物堿液相色譜分析檢測方式多以紫外法為主，在定性分析方面，紫外法檢測選擇性低，定性專屬性差。隨著二極管陣列檢測器使用的普及，顯著提高了液相分析檢測的選擇性。此外，根據(jù)生物堿的理化性質(zhì)，其它檢測方式如熒光法、電化學(xué)法、蒸發(fā)光散射法亦得到了應(yīng)用。近年來，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已應(yīng)用于生物堿分析，增強(qiáng)了對生物堿的定性檢測能力，提高了檢測靈敏度。新的接口技術(shù)及離子化方法的發(fā)展．使得HPLC-MS在生物堿的分析中得到較廣泛的應(yīng)用，近年的文獻(xiàn)報道日漸增多。 

3、生物堿液相色譜分析的樣品處理方法 
        因生物堿常具有一定的堿性，一般常用堿化液液萃取或酸水提取等方法從中草藥、中成藥及生物樣品等較復(fù)雜體系中提取純化，以達(dá)到富集和去除雜質(zhì)的目的。近年來，固相萃取（SPE）技術(shù)及超臨界流體萃取等現(xiàn)代提取純化技術(shù)亦應(yīng)用于樣品的提取純化。